028020 胰月示-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂基礎(TSC)

　　(Tryptose Sulfite Cycloserine Agar Base) (Iron Sulfite Agar)

　　用 途：

　　用于食品和臨床樣本中產氣莢膜梭菌的分離培養和計數(SN0177-92，ISO標準)。

　　原 理：

　　胰月示 、大豆蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子;葡萄糖和乳糖為可發酵糖類提供碳源;偏亞硫酸氫鈉和檸檬酸鐵銨用于檢測硫化氫的產生，使菌落中心呈黑色;卵黃含有卵磷脂，可檢測某些含卵磷脂酶的梭菌;瓊脂是培養基的凝固劑;D-環絲氨酸抑制非梭菌的細菌。

　　配方(每升)：

　　胰月 示 15g

　　大豆胨 5g

　　酵母膏粉 5g

　　偏亞硫酸氫鈉 1g

　　檸檬酸鐵銨 1g

　　瓊脂 15g

　　最終pH 7.6±0.2

　　使用方法：

　　1.稱取本品42g，加入蒸餾水或去離子水1000 mL ，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，每 瓶250 mL ，121℃高壓滅菌15 mL。

　　2.待TSC培養基冷至50℃左右，每100 mL培養基基礎加入配套試劑1支(SR0290)(D-環絲氨酸0.5mg)，(制作卵黃平板：加50%卵黃乳液10 mL到100 mL培養基中)，立即搖勻。

　　3.傾注TSC瓊脂到10個滅菌平皿中，每皿約5 mL，并迅速旋轉平皿，使瓊脂鋪平。當瓊脂凝固后，將每個平皿編號標記，以無菌操作，吸取稀釋樣品1 mL分別加到每個瓊脂平板表面中心。再向平皿中傾注TSC瓊脂15 mL，緩慢地旋轉平皿，使其與接種物混合均勻。(也可用L型玻璃棒，將0.1 mL樣品稀釋液均勻地涂布于含卵黃乳液的TSC瓊脂上，將平板水平靜置5—10 min使接種物被吸收。然后用不含卵黃的TSC瓊脂10mL覆蓋平板表層(含卵黃的TSC瓊脂最適于同時含有其他還原亞硫酸鹽梭狀芽孢桿菌的食品)。

　　4.瓊脂凝固后，將平板正置于厭氧罐內，于36±1℃培養。不含卵黃的TSC瓊脂平板培養20h，含卵黃的TSC瓊脂平板培養24h。

　　5.取出平板用肉眼觀察生長情況和觀察有無黑色菌落。挑選生長有20—200個黑色菌落的平板，用菌落計數器將黑色菌落計數并半算每克食品中產氣莢膜梭狀芽孢桿菌數。產氣莢膜梭菌的菌落在含 卵黃的培養基上呈黑色。并通常有2—4mm寬的白色沉淀環(卵磷脂酶作用的結果)。但有少數菌株的卵磷脂酶反應較弱，或呈陰性。應對所有懷疑為產氣莢膜梭菌的黑色菌落進行計數，并做進一步的證實試驗。

　　附：卵黃乳液：

　　用硬刷刷洗鮮蛋，瀝干，放70%乙醇中浸泡1h。以無菌操作取出蛋黃，加等體積無菌0.85%氯化鈉溶液，混合置4℃貯存。

　　質量控制：

　　下列菌株接種于含卵黃的TSC瓊脂平板于36±1℃培養24 h結果如下：

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規 格：100g

　　參考文獻：

　　1.SN 0177-1992 中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準 出口食品中產氣莢膜梭菌檢驗方法

　　2.ISO 7937：2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens-----Colony-count technique

　　3.SO 15213：2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of sulfite-reducing bacteria growing under anaerobic conditions