028381 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板(MYP)

　　(Mannitol Yolk Polymyxin Agar plate)

　　用 途：

　　甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂平板用于蠟樣芽孢桿菌的菌數(shù)測(cè)定及分離培養(yǎng)(GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92和SN/T2206.2-2009，ISO標(biāo)準(zhǔn))。

　　原 理：

　　蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子;D—甘露醇為可發(fā)酵糖類(lèi);氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;酚紅為pH指示劑;卵黃含有卵磷脂，蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶，在菌落周?chē)a(chǎn)生沉淀環(huán);并發(fā)酵D—甘露醇產(chǎn)酸使菌落顯黃色;多粘菌素B可抑制雜菌的生長(zhǎng)。

　　培養(yǎng)基配方(每升)：

　　蛋白胨 10g

　　牛肉膏粉 1g

　　D—甘露醇 10g

　　氯化鈉 10g

　　瓊脂 15g

　　酚紅 0.025g

　　最終pH7.4±0.2

　　使用方法： (平板計(jì)數(shù)法)

　　1、樣品的制備。

　　以無(wú)菌操作將檢樣25g(mL)用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液做成10-1—10-5的稀釋液。

　　2、取各稀釋液0.1mL接種到MYP瓊脂平板上，用滅菌L形玻璃棒均勻涂布于整個(gè)瓊脂表面。每稀釋度接種兩個(gè)MYP瓊脂平板。

　　3、將平板置于36±1℃培養(yǎng)12-20h。

　　4、選取適當(dāng)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。并計(jì)算同一稀釋度兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)。

　　蠟樣芽孢桿菌在MYP平板上生成的菌落為粉紅色，環(huán)繞產(chǎn)生卵磷脂酶沉淀環(huán)。如反應(yīng)不典型，可繼續(xù)培養(yǎng)24h再計(jì)數(shù)。

　　5、計(jì)數(shù)后從每個(gè)平板上選取5個(gè)已計(jì)數(shù)的菌落，按有關(guān)操作進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。

　　6、根據(jù)證實(shí)實(shí)驗(yàn)確定為蠟樣芽孢桿菌的菌落數(shù)，按比例計(jì)算出該皿內(nèi)的蠟樣芽孢桿菌菌落數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)，即得每克(或mL)樣品所含蠟樣芽孢桿菌數(shù)。例如MYP平板的可疑菌落為25個(gè)，取5個(gè)鑒定，證實(shí)為4個(gè)，乘上稀釋倍數(shù)(如10-4)，再乘上1 g(或mL)檢樣數(shù)(取的是0.1mL樣)則為：

　　25×4/5×10-4×10=2×106

　　質(zhì)量控制：

　　質(zhì)控菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)24h，結(jié)果如下。

　　貯 存：貯存于4-8℃。貯存期三個(gè)月。

　　規(guī) 格：20個(gè)/盒

　　參考文獻(xiàn):

　　1. GB/T 4789.14-2003 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 蠟樣芽孢桿菌

　　2. GB/T 4789.28-2003 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法,培養(yǎng)基和試劑

　　3. SN 0176-92 中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)方法

　　4. SN/T2206.2-2009 中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 化妝品微生物檢驗(yàn)方法 第2部分：需氧芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌

　　5. ISO7932：2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus-----Colony-count technique at 30℃