028380 甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)(MYP)

　　(Mannitol Yolk Polymyxin Agar Base)

　　用 途：

　　用于蠟樣芽孢桿菌的菌數(shù)測定及分離培養(yǎng)(GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92和SN/T2206.2-2009，ISO標準)。

　　原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素和生長因子;D—甘露醇為可發(fā)酵糖類;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;酚紅為pH指示劑;卵黃含有卵磷脂，蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶，在菌落周圍產(chǎn)生沉淀環(huán);并發(fā)酵D—甘露醇產(chǎn)酸使菌落顯黃色;多粘菌素B可抑制雜菌的生長。

　　配方(每升)：

　　蛋白胨 10g

　　牛肉膏粉 1g

　　D—甘露醇 10g

　　氯化鈉 10g

　　瓊脂 15g

　　酚紅 0.025g

　　最終pH7.4±0.2

　　使用方法： (平板計數(shù)法)

　　1、稱取本品46g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，每瓶100mL，121℃滅菌15分鐘。

　　2、用時加熱溶化瓊脂，冷至50℃后，每100mL培養(yǎng)基基礎(chǔ)中加入配套試劑1支 (SR0170)( 多粘菌素B10000IU) 和50%卵黃液5mL，混勻后傾注滅菌培養(yǎng)皿。

　　3、樣品的制備。

　　以無菌操作將檢樣25g(mL)用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液做成10-1—10-5的稀釋液。

　　4、取各稀釋液0.1mL接種到MYP瓊脂平板上，用滅菌L形玻璃棒均勻涂布于整個瓊脂表面。每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。

　　5、將平板置于36±1℃培養(yǎng)12—20h。

　　6、選取適當菌落的平板進行計數(shù)。并計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數(shù)。

　　蠟樣芽孢桿菌在MYP平板上生成的菌落為粉紅色，環(huán)繞產(chǎn)生卵磷脂酶沉淀環(huán)。如反應(yīng)不典型，可繼續(xù)培養(yǎng)24h再計數(shù)。

　　7、計數(shù)后從每個平板上選取5個已計數(shù)的菌落，按有關(guān)操作進行證實實驗。

　　8、根據(jù)證實實驗確定為蠟樣芽孢桿菌的菌落數(shù)，按比例計算出該皿內(nèi)的蠟樣芽孢桿菌菌落數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)，即得每克(或mL)樣品所含蠟樣芽孢桿菌數(shù)。例如MYP平板的可疑菌落為25個，取5個鑒定，證實為4個，乘上稀釋倍數(shù)(如10-4)，再乘上1 g(或mL)檢樣數(shù)(取的是0.1mL樣)則為：

　　25×4/5×10-4×10=2×106

　　附：50%卵黃液: 取鮮雞蛋，用硬刷將蛋殼徹底洗凈，瀝干，放于70%酒精溶液中浸泡1h，以無菌操作取出卵黃，加入等量滅菌生理鹽水，混勻后備用。

　　質(zhì)量控制：

　　質(zhì)控菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)24h，結(jié)果如下。

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格：250g

　　參考文獻:

　　1. GB/T 4789.14-2003 中華人民共和國國家標準 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 蠟樣芽孢桿菌

　　2. GB/T 4789.28-2003 中華人民共和國國家標準 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 染色法,培養(yǎng)基和試劑

　　3. SN 0176-92 中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準 出口食品中蠟樣芽孢桿菌檢驗方法

　　4. SN/T2206.2-2009 中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準 化妝品微生物檢驗方法 第2部分：需氧芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌

　　5.ISO7932：2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus-----Colony-count technique at 30℃