022020 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)

　　(Nutrient Agar)

　　用 途：

　　營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測(cè)定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO標(biāo)準(zhǔn))。

　　原 理：

　　蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；氯化鈉能維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

　　配方(每升)：

　　蛋白胨10g

　　牛肉膏粉3g

　　氯化鈉 5g

　　瓊脂15g

　　最終pH 7.3±0.2

　　使用方法：

　　1、 稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)33g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。

　　2、 (食品)以無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣25克(或25mL)，放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，充分振搖，即為1：10的均勻稀釋液。依次做1：100，1：1000……稀釋液。

　　3、 根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì)，選擇2—3個(gè)合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時(shí)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。

　　4、 稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻，同時(shí)將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。待瓊脂凝固后，倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。

　　5、 觀察結(jié)果。

　　6、 菌落計(jì)數(shù)方法：

　　做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏，在計(jì)下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

　　7、 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：

　　選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，應(yīng)采用兩個(gè)平板平均數(shù)，其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有我鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí)(菌落之間無(wú)明顯界線(xiàn))，若僅有一條鏈，可視為一個(gè)菌落;如有不同來(lái)源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈視為一個(gè)菌落計(jì)

　　A：稀釋度的選擇：

　　應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)附表)。

　　若有兩個(gè)稀釋度.其生長(zhǎng)的菌落數(shù)無(wú)均在30—300之間，則視兩者之比如何來(lái)決定。若其比值小于或等于2，則應(yīng)報(bào)告其平均數(shù);若大于2則報(bào)告其較小的數(shù)字(見(jiàn)表中例2及3)。

　　若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例4)。

　　若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最底的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例5)。

　　若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以最底稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例6)。

　　若有稀釋度的平均菌菌落數(shù)均不在30—300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表中例7)。

　　菌落數(shù)的報(bào)告：

　　菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位數(shù)字后面的有效數(shù)值，以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以用10的指數(shù)來(lái)表示(見(jiàn)表中“報(bào)告方式欄”)。

　　稀釋度選擇及菌落數(shù)報(bào)告方式

　　質(zhì)量控制：

　　本品接種下列菌株，置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h，結(jié)果如下：

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格： 250g

　　參考文獻(xiàn):

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　　3. GB15981-1995 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)

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